问题标题：
为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了marker是彩色转移缓冲液配比：甘氨酸（MW75.07）2.9g,Tris（MW121.14）5.8g,SDS0.37g,甲醇200ml,蒸馏水至1000ml.转移
问题描述：
为什么我做Western,电泳时预染Marker很值条带也很清晰,但是转膜后膜上条带都没有了
marker是彩色
转移缓冲液配比：
甘氨酸（MW75.07）2.9g,Tris（MW121.14）5.8g,SDS0.37g,甲醇200ml,蒸馏水至1000ml.
转移缓冲液在冰箱冷冻,没有结冰.
膜用甲醇处理15秒,水洗一次.
转膜温度,十度左右,80v两小时
转膜之后,胶上没有颜色.
黎时才回答：
不排除是预染Marker质量又问题
蔡维玲回答：
marker没有问题，实验室其他人做实验就没有问题。因为我是独立出来的，所以实验过程和仪器与他们不是很相同
黎时才回答：
那建议你在适当延长一下转膜的时间吧，三、四个小时都可以的。
蔡维玲回答：
用抗体检测过之后，150kd的蛋白都转过去了，各种大小的蛋白都有转过去。也正常，marker应该不会需要太长时间。我转膜时上下的滤纸有接触，会影响marker的转膜吗？
黎时才回答：
滤纸接触不会有任何影响，既然大分子蛋白转过去了，说明一定是你的预染Marker是有问题的，一般预染Marker上样之前也要用水煮一下的，再用就是是不是你的用量少了呢？
蔡维玲回答：
用量不少，不过marker没有煮过，预染的应该不用煮吧也许这是问题所在吧
黎时才回答：
嗯，多加一些，至少也得6uL，我们用的时候都煮一下的。
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