问题标题:
PEG融合法技术关键简述在细胞工程中PEG融合法过程与技术关键?
问题描述:

PEG融合法技术关键

简述在细胞工程中PEG融合法过程与技术关键?

司慧勇回答:
  PEG法融合PEG为一种高分子化合物,由于含有醚键而具负极性,与水、蛋白质和碳水化合物等一些正极化基团能形成氢键.当PEG分子足够长时,可作为邻近原生质体表面之间的分子桥而使之粘连.PEG也能连接Ca2+等阳离子.Ca2+可在一些负极化基团和PEG之间形成桥,因而促进粘连.在洗涤过程中,连接在原生质体膜上的PEG分子可被洗脱,这将引起电荷的紊乱和再分布,从而引起原生质体融合.高Ca2+,高pH清洗则增加了质膜的流动性,因而大大提高了融合频率.洗涤时的渗透冲击对融合也可能起作用.1吸取原生质体悬液一滴置载玻片上静置1-2分钟,使其停止流动,沉降至悬液底部,观察其形态.   点击放大2在悬液周围缓缓加一滴PEG溶液,轻轻转动载片使其混匀,静置10分钟左右,观察其原生质体随机聚集现象.3逐渐加高Ca2+高pH洗涤液,使其混匀,并用吸水纸吸去多余水份,观察聚集细胞团的融合过程.
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