问题标题:
核基因扩增和叶绿体基因的扩增有什么不一样的吗?
问题描述:
核基因扩增和叶绿体基因的扩增有什么不一样的吗?
毛军捷回答:
首先要明白的是核基因和叶绿体基因是不一样的
除了细胞核中含有DNA,细胞中的叶绿体也含有DNA
有专门的细胞核DNA提取试剂盒和胞质DNA提取试剂盒
应用这两种试剂盒提取的DNA作为模板就可以特异地扩增不同来源的DNA
纪兆辉回答:
我用的CTAB法提取的DNA,应该有叶绿体DNA和核DNA,以前做过核基因序列ITS,可以扩出来;现在想扩增一个新的核基因内含子序列,不知道怎么回事,一直扩不出来……
毛军捷回答:
扩增不出来的问题太多了引物问题模板问题PCR反应条件等等这么笼统地说,很难提供建议
纪兆辉回答:
我用的是通用引物,模板做别的序列可以做出来,pcr反应程序用了这边一直用的,也用了文献里面的,都不行,我有点怀疑是引物合成有问题,可是不知道怎么检验
毛军捷回答:
如果怀疑引物问题,就换一家引物公司重合成引物价格那么便宜,检验的成本都够你合成N多条了最好是找实验室的师兄姐一讨论下,对症下药
纪兆辉回答:
我订的引物中有兼并碱基I,特别贵,这一对儿引物就要近800元,他们都没有做过这个引物,相当郁闷了……
毛军捷回答:
那就帮不上你了,我也没做过这种引物,抱歉
纪兆辉回答:
谢谢你~
毛军捷回答:
给你一个建议,降低退火温度试试吧,40度我都做出来过的
纪兆辉回答:
嗯,好的,我试试,我其实已经试过45度了,这是我做pcr用过的最低温度,再试试40,非常感谢!
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