问题标题:
通过PCR方法如何连接两个基因
问题描述:
通过PCR方法如何连接两个基因
曹兰斌回答:
看你的要求.
1楼那位同学的回答没有问题,通过在引物上设计酶切位点,做酶切、连接即可以连接两端基因.
但如果你的这两段基因不好设计酶切位点,或者你不希望在这两段基因之间存在有其余的多余碱基,而且你又特别强调用PCR的方法去做连接,那么我推荐overlap-PCR.把A基因3'端的序列加到扩增B基因的上游引物5'端,把B基因5'端的序列加到扩增A基因的下游引物的3'端.分别扩增A、B两基因,这样A的3’端和B的5‘端就形成了互补.切胶回收这两个PCR产物,稀释并混合,以此为模板,以A基因的上游引物和B基因的下游引物为引物对,扩增.这样就可以得到AB拼接到一起的产物.
具体的引物设计要求你可以多去看看overlap-PCR的文献,这种方法很方便的.
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