问题标题：
科学家为了研究一种蜂鸟β-球蛋白基因的功能，将该基因导入到大肠杆菌（菌落为白色）细胞进行复制和表达（如图1）．所使用的质粒中有ampⅡ和lacZ两种标记基因，前者让受体细胞具有抗
问题描述：
科学家为了研究一种蜂鸟β-球蛋白基因的功能，将该基因导入到大肠杆菌（菌落为白色）细胞进行复制和表达（如图1）．所使用的质粒中有ampⅡ和lacZ两种标记基因，前者让受体细胞具有抗氨苄青霉素的能力，后者表达的半乳糖苷酶会使一种被称为X-gal的物质呈现蓝色．
（1）将蜂鸟的β-球蛋白基因导入大肠杆菌，需要先用同种___酶处理蜂鸟的DNA和质粒，并用___酶进一步处理以期得到重组质粒，最后再与经___处理得到的感受态大肠杆菌混合；
（2）使用添加了___和___的培养基培养经上述处理的大肠杆菌，选择___色的菌落克隆培养，就获得了导入重组质粒的大肠杆菌；
（3）提取已经确认导入重组质粒的大肠杆菌的___，用图2中的___两种引物完成PCR扩增，能说明重组质粒中整合的外源DNA片段包含了蜂鸟β-球蛋白基因；
（4）用上述方法可以获得导入蜂鸟各种基因的诸多大肠杆菌的克隆，形成蜂鸟的___，但是，导入大肠杆菌的蜂鸟基因可能无法表达正常功能的蛋白质，原因是___（写出一项即可）．
陈骏回答：
（1）将蜂鸟的β-球蛋白基因导入大肠杆菌前，需先构建基因表达载体，即先用同种限制酶处理蜂鸟的DNA和质粒，并用DNA连接酶酶进一步处理以期得到重组质粒；将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法，即用Ca2+处理微生物细胞，使其处于易于吸收周围环境中DNA分子的感受态．
（2）质粒中有ampⅡ和lacZ两种标记基因，前者让受体细胞具有抗氨苄青霉素的能力，后者表达的半乳糖苷酶会使一种被称为X-gal的物质呈现蓝色．在构建基因表达载体时，ampⅡ基因完好，而lacZ基因被破坏，因此使用添加了氨苄青霉素和X-gal的培养基培养经上述处理的大肠杆菌，选择白色的菌落克隆培养，就获得了导入重组质粒的大肠杆菌．
（3）提取已经确认导入重组质粒的大肠杆菌的DNA，用图2中的B和D两种引物完成PCR扩增（子链延伸的方向是5′→3′），能说明重组质粒中整合的外源DNA片段包含了蜂鸟β-球蛋白基因．
（4）基因组文库包含某种生物所有的基因，而部分基因文库只包含该生物部分基因．所以，用上述方法可以获得导入蜂鸟各种基因的诸多大肠杆菌的克隆，形成蜂鸟的基因文库；导入大肠杆菌的蜂鸟基因可能无法表达正常功能的蛋白质，原因是大肠杆菌无法正常完成蜂鸟基因表达的肽链的加工（蜂鸟基因中包含了非编码序列，答案合理即可）．
故答案为：
（1）限制酶 DNA连接酶 Ca2+
（2）氨苄青霉素 X-gal 白色
（3）DNA B和D
（4）基因文库 大肠杆菌无法正常完成蜂鸟基因表达的肽链的加工（蜂鸟基因中包含了非编码序列，答案合理即可）
查看更多
