问题标题:
【研究人员在培育转bt基因抗虫番茄过程中,选用hpt(抗潮霉素基因)为标记基因.为了提高转基因番茄的安全性,在筛选成功后,用Cre酶(能特异识别loxp位点,切除loxp位点间的基因序列)切】
问题描述:

研究人员在培育转bt基因抗虫番茄过程中,选用hpt(抗潮霉素基因)为标记基因.为了提高转基因番茄的安全性,在筛选成功后,用Cre酶(能特异识别loxp位点,切除loxp位点间的基因序列)切除hpt.相关技术流程如图.

(1)步骤①中,为防止原番茄植株带有病毒,应选用___作为外植体;培养时,常在培养基中加入2,4-D,其作用是___.

(2)步骤②将bt基因导入愈伤组织的最常用方法是___.

(3)步骤③需在培养基中加入___以初步筛选出转入bt基因的植株.

(4)提取F1植株的基因组DNA,用hpt特异性引物进行PCR.其中,植株1和2的PCR产物电泳结果如上图,据此判断,植株___为不具有hpt的抗虫番茄.

冯云凤回答:
  (1)由于植物分生区附近的病毒极少,甚至无病毒,因此步骤①中,为防止原番茄植株带有病毒,应选用分生组织(或茎尖或根尖或芽尖)作为外植体;该步骤所用的培养基中要加入2,4-D,其作用是诱导形成愈伤组织(或诱导脱分化).   (2)将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法,因此步骤②将bt基因导入愈伤组织的最常用方法是农杆菌转化法.   (3)由图可知,抗性基因是潮霉素抗性基因,因此步骤③需在培养基中加入潮霉素以初步筛选出转入bt基因的植株.   (4)提取F1植株的基因组DNA,用hpt特异性引物进行PCR.其中,植株1出现PCR产物,说明其具有hpt,而植株2没有出现PCR产物,说明其不具有hpt.因此,植株2为不具有hpt的抗虫番茄.   故答案为:   (1)分生组织(或茎尖或根尖或芽尖)诱导形成愈伤组织(或诱导脱分化)   (2)农杆菌转化法   (3)潮霉素   (4)2
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