问题标题：
如图为某科研小组采用“基因靶向”技术，对ES细胞进行的遗传改造．先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的胚胎干细胞（ES细胞）中，再将改造后的胚胎干细胞移植回囊胚继续发育成
问题描述：
如图为某科研小组采用“基因靶向”技术，对ES细胞进行的遗传改造．先将小鼠的棕褐毛色基因导入黑色纯种小鼠的胚胎干细胞（ES细胞）中，再将改造后的胚胎干细胞移植回囊胚继续发育成小鼠的过程．据图分析不正确的是（）
A．第Ⅱ步使用的工具酶是DNA连接酶以及限制酶
B．完成第Ⅱ步操作，得到由两个DNA片段连接成的产物，必定是载体与棕褐毛色基因形成的重组DNA分子
C．第Ⅲ步操作完成后，还需筛选出目的基因已成功导入的胚胎干细胞，并将该胚胎干细胞注射到囊胚中
D．ES细胞除可进行如图操作外，也可进行冷冻保存
陈永生回答：
A、第Ⅱ步为基因表达载体的构建过程，该过程需使用的工具酶是DNA连接酶以及限制酶，A正确；
B、完成第Ⅱ步操作，得到由两个DNA片段连接成的产物，可能是载体与棕褐毛色基因形成的重组DNA分子，也可能是载体自身连接的产物或棕褐毛色基因自身连接的产物，B错误；
C、第Ⅲ步操作完成后，还需筛选出成功导入目的基因的胚胎干细胞，并将该胚胎干细胞注射到囊胚中，C正确；
D、在体外培养条件下，ES细胞可不断增殖而不发生分化，可以进行某些遗传改造，也可进行冷冻保存，D正确．
故选：B．
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