问题标题:
(2014•金山区一模)图一为含有目的基因的DNA(外源DNA),图二为某质粒,表中是几种限制酶识别序列及其切割位点.用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒.请根据上述信息分析回答:
问题描述:
(2014•金山区一模)图一为含有目的基因的DNA(外源DNA),图二为某质粒,表中是几种限制酶识别序列及其切割位点.用图中的外源DNA与质粒构建重组质粒.请根据上述信息分析回答:
限制酶 | BamⅠ | SmaⅠ | EcoRⅠ | HinRⅢ |
识别序列及切割位点 |
(2)DNA分子的一条多核苷酸链中,两个脱氧核苷酸之间以______和______相连.用SmaⅠ限制酶切割外源DNA,切开的是______和______之间相连的键.
(3)如果用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒,其结果是______.
(4)如果使用EcoRⅠ酶切割外源DNA和质粒,将目的基因片段与切割后的质粒混合,加入______酶,获得的环状DNA可能有哪几种情况?______.
(5)如果使用BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒,比用EcoRⅠ酶切割的优点是______.
(6)将重组质粒导入大肠杆菌中,培养基中需加入______进行鉴别和筛选含有重组质粒(目的基因)的细胞.
唐鸣回答:
(1)质粒切割前是双链环状DNA分子,所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键,故不含游离的磷酸基团.从图1可以看出,质粒上只含有一个SmaⅠ的切点,因此被改酶切割后,质粒变为线性双链DNA分子,因每条链上含有一个游离的磷酸基团,因此切割后含有两个游离的磷酸基团.
(2)DNA分子的一条多核苷酸链中,两个脱氧核苷酸之间以磷酸基团和五碳糖相连.由题目可知,SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C.
(3)用SmaⅠ酶切割外源DNA和质粒来重组质粒,其结果是目的基因与抗性基因被破坏.
(4)将游离末端重新结合形成DNA使用的是连接酶,获得的环状DNA可能有:原质粒切割的粘性末端重新连接;目的基因的粘性末端连接而成环状;目的基因与切割质粒形成重组质粒.
(5)如果使用BamHⅠ和HinRⅢ两种限制酶同时处理外源DNA和质粒,比用EcoRⅠ酶切割的优点是:避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化.
(6)导入重组质粒的大肠杆菌能在含有抗生素B的培养基上生存,因此为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌,一般需要用添加抗生素的培养基培养.
故答案:
(1)两
(2)磷酸基团 五碳糖 G C
(3)目的基因与抗性基因被破坏
(4)连接酶 原质粒切割的粘性末端重新连接;目的基因的粘性末端连接而成环状;目的基因与切割质粒形成重组质粒
(5)避免切割的外源DNA、质粒的粘性末端自身环化
(6)抗生素
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