问题标题:
测定蛋白质含量的方法有哪些,其原理各是什么.
问题描述:

测定蛋白质含量的方法有哪些,其原理各是什么.

郭民回答:
  Bradford法测定蛋白质浓度   (一)实验原理   双缩脲法(Biuret法)和Folin—酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋   白质溶液测定的方法.   1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白   质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定   法.   考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(max),由465nm变为595n   m,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.   在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比.   Bradford法的突出优点是:   (1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1g.这是因为蛋白质与染料结合后产生   的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的   多.   (2)测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的   大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.   因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.   (3)干扰物质少.如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不   干扰此测定法.
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